在CHO细胞表达系统中,GS系统是一种基因表达载体系统,其核心原理是通过转染含有谷氨酰胺合成酶(GS)基因的表达载体到CHO细胞中,利用GS基因编码的酶在无谷氨酰胺培养基中实现细胞选择和蛋白表达。以下是具体说明:
一、核心组成与原理
GS基因功能 GS基因编码谷氨酰胺合成酶,该酶能将谷氨酸和氨转化为谷氨酰胺,为细胞提供必需氨基酸。2. 无谷氨酰胺培养基的选择性
传统CHO细胞依赖外源谷氨酰胺生存,但易因代谢过程中谷氨酰胺分解产生氨而受损。转染GS基因后,细胞可通过自身合成谷氨酰胺,从而在无谷氨酰胺培养基中存活。
选择机制
添加L-氨基亚砜蛋氨酸(MSX)等化合物可抑制内源性GS活性,仅转染了GS基因的细胞能利用MSX维持代谢,从而实现细胞筛选。
二、应用与优势
避免氨毒性
通过抑制内源性GS,减少氨积累对细胞的毒性作用,提高重组蛋白表达的稳定性。
简化培养条件
可在无谷氨酰胺培养基中高效培养细胞,降低培养成本。
扩展蛋白表达系统
与依赖外源谷氨酰胺的CHO细胞系(如DHFR系统)相比,GS系统更通用,适用于更多细胞类型。
三、与其他系统的区别
DHFR系统: 通过删除DHFR基因使细胞无法合成四氢叶酸,需添加次黄嘌呤和胸腺嘧啶维持生存。 GS系统
综上,GS系统通过基因工程改造CHO细胞,使其在无谷氨酰胺环境中稳定生长,同时实现高效重组蛋白表达,是细胞工程领域的重要工具。